.雜交　（1） 盛有2×***的塑料盤同，將干烤的濾膜飄浮在液面上，浸濕5分鐘。（2） 將濾膜轉(zhuǎn)到200ml預(yù)洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起，放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿，放到位于培養(yǎng)箱內(nèi)的旋轉(zhuǎn)平臺(tái)上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中，應(yīng)緩緩搖動(dòng)濾膜，防止它們粘在一起。（3） 用泡過預(yù)洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去***碎片，以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號(hào)的強(qiáng)度和清晰度。（4） 將濾膜轉(zhuǎn)到盛有150ml預(yù)雜交液的玻璃中，在適宜溫度（即在水溶液中雜交時(shí)用68℃，而在50%甲酰胺中雜交時(shí)用42℃）下，預(yù)雜交1-2小時(shí)。（5） 將32 P標(biāo)記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘，迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間，盛濾膜的容器應(yīng)蓋嚴(yán)，以防液體蒸發(fā)。

******原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟：

       1. 將準(zhǔn)備做原位雜交的樣本常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。

       2. 玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。

       3. 石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合，染色體原位雜交技術(shù)服務(wù)，室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。

       4. 暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶（1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻），37℃或室溫消化3--30分鐘（視標(biāo)本新舊、厚薄自行調(diào)整）。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。

分子病理檢測(cè)的意義：

通過分子檢測(cè)協(xié)助病理診斷

　　某些腫1瘤具有特定的分子病理學(xué)改變，對(duì)于病理常規(guī)染色難于診斷的這些腫1瘤，進(jìn)行分子病理檢測(cè)可協(xié)助得出準(zhǔn)確的病理診斷。例如淋巴1瘤的鑒別診斷往往依賴于形態(tài)和免1疫組化的綜合判斷，但有些時(shí)候，這些手段也不能滿足診斷的需要，這時(shí)我們通過IG或TCR***重排檢測(cè)，可協(xié)助鑒別淋巴細(xì)胞的普通增殖和腫1瘤性增殖。

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